對(duì)樣品的測(cè)定，在選擇方法時(shí)，可以?xún)?yōu)先選擇標(biāo)準(zhǔn)方法、我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法。對(duì)于非標(biāo)準(zhǔn)方法、超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法，擴(kuò)充和修改過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)方法都需要對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證，既進(jìn)行方法性能檢驗(yàn)，證明所選方法符合分析要求、切實(shí)可行，滿(mǎn)足客戶(hù)要求。

然而，怎么做方法驗(yàn)證

1  方法驗(yàn)證內(nèi)容
       方法驗(yàn)證內(nèi)容主要有標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、檢出限、定量限、精密度和準(zhǔn)確度。

1.1  標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
       采用儀器對(duì)方法進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，首先要建立樣品和儀器之間的關(guān)系。通常采用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)表示，利用不少于5點(diǎn)（不包括原點(diǎn)）的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)算出待測(cè)物和儀器響應(yīng)值之間的線(xiàn)性回歸方程并計(jì)算相關(guān)系數(shù)（r）：以待測(cè)物的量（如ng）或濃度（如ng/mL）為橫坐標(biāo)，響應(yīng)值（吸光度或熒光強(qiáng)度）為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，確定線(xiàn)性范圍，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)應(yīng)該大于0.9990。實(shí)驗(yàn)室要求原子吸收火焰法r>0.9990，石墨爐法r>0.9950，原子熒光光度法r>0.9990。

    在做方法驗(yàn)證之前，我們首先得知道樣品中重金屬元素的限度（如水產(chǎn)及水產(chǎn)制品中鉛的限度為0.5mg/kg），根據(jù)樣品的性質(zhì)及儀器的靈敏度等因素，然后確定線(xiàn)性范圍，線(xiàn)性范圍中Zui高點(diǎn)的標(biāo)液濃度一般是重金屬元素的限度濃度的1~2倍，這是比較關(guān)鍵的一步。例子：稱(chēng)0.5g水產(chǎn)及水產(chǎn)制品經(jīng)微波消解、趕酸處理后，轉(zhuǎn)移定容到25mL容量瓶中，如果樣品中鉛的含量為鉛的*0.5mg/kg，那么樣品中的濃度為10ng/mL，設(shè)定標(biāo)液曲線(xiàn)范圍的Zui高點(diǎn)濃度為20ug/mL，由于大部分樣品的含量都在鉛的*0.5mg/kg以下，所以按照稱(chēng)樣量為0.5g，定容到25mL，線(xiàn)性范圍為0~25ng/mL是比較合適的。

       標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)配制步驟（以鉛標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)配制方法為例）：
（1）精密吸取單元素標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液液（1.0mg/mL,國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，批號(hào)GBW08619）1.0mL，置100mL量瓶中，加硝酸（0.5mol/L）至刻度，混勻，得到10ug/mL鉛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；

（2）再精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.5mL，置200mL量瓶中，加硝酸（0.5mol/L）至刻度，混勻，得到25ng/mL鉛標(biāo)準(zhǔn)使用液。用石墨爐自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)稀釋成每1mL含2.5、5.0、10.0、15.0、25.0ng鉛并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，或根據(jù)試樣中鉛含量稀釋成適當(dāng)?shù)臐舛忍荻裙┰游辗止夤舛扔?jì)測(cè)定。

（3）將標(biāo)準(zhǔn)工作液導(dǎo)入原子吸收分光光度計(jì)，用超純水調(diào)零，在283.3nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（儀器可以自動(dòng)進(jìn)行繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)）。

1.1.1  標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)配置注意事項(xiàng)
（1）先要確定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的范圍，可以從重金屬的限值入手，GB 2762-2012食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物*，多種食品中鉛的限值如下：

   然后調(diào)整稱(chēng)樣量，如果按照飲料中鉛Zui

大限值0.05mg/kg，稱(chēng)取1g飲料樣品，處理后定容到10mL，那么樣品溶液濃度為5ng/mL，由于大部分飲料含重金屬的量都要比限值低，所以要靈活調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的范圍，或者稱(chēng)樣量的大小。

（2）要考慮儀器測(cè)量該金屬元素的靈敏度，如果測(cè)量該元素的靈敏度低，可以適當(dāng)?shù)脑黾臃Q(chēng)樣量，減少定容體積，增大標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液的濃度。相反，如果該元素的靈敏度高，要相對(duì)減少稱(chēng)樣量，增大定容體積，必要的時(shí)候進(jìn)行稀釋。
（3）如果樣品含量較高（需要經(jīng)驗(yàn)），在稱(chēng)樣時(shí)和定容時(shí)應(yīng)該考慮Zui好使樣品溶液的濃度落在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的1/3~2/3的濃度范圍，在這個(gè)范圍時(shí)，測(cè)量的準(zhǔn)確性和精密度相對(duì)較高。

（4）配制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)時(shí)，盡可能使用校正過(guò)的移液槍、移液管、容量瓶，標(biāo)準(zhǔn)溶液中間儲(chǔ)備液在配制好后放置一段時(shí)間（一般為10~20min），再稀釋成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)系列工作溶液。
（5）在稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制標(biāo)準(zhǔn)系列時(shí)，一般使用同一個(gè)移液槍或者刻度移液管進(jìn)行稀釋?zhuān)ＷC相同的偏差，有利于配制出相關(guān)系數(shù)較好的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。